Александр Анатольевич Смирнов
Фармакология взаимодействия регуляторных пептидных систем головного мозга в механизмах подкрепления
Глава 3. Результаты собственных исследований
3.1.Исследование эффектов введения антагонистов орексина в желудочки мозга для подкрепляющих свойств психоактивных веществ
Крысам самцам Вистар вживляли биполярные электроды в латеральный гипоталамус для исследования реакции самостимуляции вкамере Скиннера и микроканюли в левый боковой желудочек для изучения центральных эффектов действия антагониста орексина SB-408124 (1 мкл на инъекцию) на подкрепляющие свойства фармакологических веществ. Исследования показали, что при системном введении фенамин (1 мг/кг, в/бр) на 32% повышал частоту нажатий педали в камере Скиннера (т.е. число нажатий педали за 10 мин) при регистрации реакции самостимуляции латерального гипоталамуса (табл. 1,2,3). А введение антагонистов орексина в обоих дозах (1мкг/мкл;10 мкг/мкл) в желудочек мозга снижало эффекты фенамина (число нажатий на педаль) (табл. 1,2).
Табл. 1. Действие фенамина при внутрибрюшинном введении, антагониста орексина SB-408124 (1мкг), рекомбинантного антагониста OX1R рецепторов Orexin B18-28 (1мкг) при внутрижелудочковом введении и их комбинации на реакцию самостимуляции у крыс.
Вещество, доза
Число нажатий на педаль за 10мин
Пороги самостимуляции
(мкА)
До введения
После введения
До введения
После введения
Фенамин 1мг/кг, в/б
144,5±19
100%
216,25±26*
132%
143,25±18
100%
125±22
85,9%
SB-408124 1мкг/мкл, в/ж
78±10
100%
76±9
101%
89±11
100%
88±11
99%
Фенамин 1мг/кг, в/б + SB-408124 1мкг/мкл, в/ж
116,5±15
100%
129,75±18
115%
80±10
100%
68,5±12
96,8%
Orexin B18-28 1мкг/мкл, в/ж
125,9±16
100%
123,3±16
98,8%
121.3±15
100%
120±15
100,1%
Фенамин 1мг/кг, в/б + Orexin B18-28 1мкг/мкл, в/ж
264,4±33
100%
278,5±35
113,4 %
214,4±28
100%
212,5±30
103,8%
Напротив, оба антагониста орексина (1 мкг, в/ж) достоверно не меняли основных показателей при регистрации реакции самостимуляции в камере Скиннера (как числа нажатий на педаль, так и порогов реакции самостимуляции). При введении SB-408124 (1мкг, в/ж) с фенамином (1мг/кг, в/б), наблюдается снижение эффектов фенамина. Так число нажатий на педаль за 10 минут, относительно показателей фенамина (1мг/кг, в/б), снижается со 132% до 115%, а пороги самостимуляции повышаются с 85,9% до 96,8%. При введении антагониста орексина Orexin B18-28 (1мкг, в/ж) с фенамином (1мг/кг, в/б), также наблюдается снижение эффектов фенамина. Число нажатий на педаль за 10 минут, относительно показателей фенамина (1мг/кг, в/б), снижается со 132% до 113,4%, а пороги самостимуляции повышаются с 85,9% до 103,8%.
Табл. 2. Действие фенамина при внутрибрюшинном введении, антагониста орексина SB-408124 (10мкг), Orexin B18-28 (10мкг) при внутрижелудочковом введении и их комбинации на реакцию самостимуляции у крыс.
Вещество, доза
Число нажатий на педаль за 10мин
Пороги самостимуляции
(мкА)
До введения
После введения
Довведения
После введения
Фенамин 1мг/кг, в/б
144,5±19
100%
216,25±26*
132%
143,25±18
100%
125±22
85,9%
SB-408124 10 мкг/мкл, в/ж
118±13
100%
121±10
103%
62±8
100%
58,7±5
98%
Фенамин 1мг/кг, в/б + SB-408124 10 мкг/мкл, в/ж
86,5±7
100%
97,1±9
109,6%
110±14
100%
118,3±15
105,1%
Orexin B18-28 10 мкг/мкл, в/ж
93,9±10
100%
92,5±7
99,3%
141,7±11
100%
145±13
103%
Фенамин 1мг/кг, в/б + Orexin B18-28 10 мкг/мкл, в/ж
134,8±16
100%
145,5±10
106,4 %
82,5±8
100%
86,1±6
103%
В дозе 10мкг/мкл оба антагониста орексина достоверно не изменяли основных показателей при регистрации реакции самостимуляции в камере Скиннера (как числа нажатий на педаль, так и порогов реакции самостимуляции). Однако при введении SB-408124 (10мкг, в/ж) с фенамином (1мг/кг, в/б), наблюдается явное снижение эффектов фенамина. Так число нажатий на педаль за 10 минут, относительно показателей фенамина (1мг/кг, в/б), снижается со 132% до 109,6%, а пороги самостимуляции повышаются с 85,9% до 105,1%. При введении антагониста орексина Orexin B18-28 (10мкг, в/ж) с фенамином (1мг/кг, в/б), также наблюдается снижение эффектов фенамина. Число нажатий на педаль за 10 минут,относительно показателей фенамина (1мг/кг, в/б), снижается со 132% до 106,4%, а пороги самостимуляции снижаются со 122,9% до 103%.
Табл. 3. Действие фенамина при внутрибрюшинном введении, SB-408124 (0,1мкг), Orexin B18-28 (0,1мкг) при внутрижелудочковом введении и их комбинации на реакциюсамостимуляции у крыс.
Вещество, доза
Число нажатий на педаль за 10мин
Пороги самостимуляции
(мкА)
До введения
После введения
Довведения
После введения
Фенамин 1мг/кг, в/б
144,5±19
100%
216,25±26*
132%
143,25±18
100%
125±22
85,9%
SB-408124 0,1 мкг/мкл, в/ж
103,6±10
100%
105,1±9
101%
94±10
100%
92±10
99%
Фенамин 1мг/кг, в/б + SB-408124 0,1 мкг/мкл, в/ж
126,4±16
100%
149,9±17
129%
90±10
100%
104±12
117,6%
Orexin B18-28 0,1 мкг/мкл, в/ж
95,7±12
100%
94,9±10
98,3%
85±10
100%
86,4±7
101 %
Фенамин 1мг/кг, в/б + Orexin B18-28 0,1 мкг/мкл, в/ж
154,7±21
100%
203,4±18
133 %
135±14
100%
154,6±18
118,3%
В дозе 0,1 мкг/мкл оба антагониста орексина достоверно не изменяли основных показателей при регистрации реакции самостимуляции в камере Скиннера (как числа нажатий на педаль, так и порогов реакции самостимуляции). При введении антагонистов орексина (0,1 мкг, в/ж) с фенамином (1мг/кг, в/б), не наблюдалось достоверное изменение эффектов фенамина (как числа нажатий на педаль, так и порогов реакции самостимуляции).
Опыты с условной реакцией предпочтения места проводили в прямоугольной двухкамерной экспериментальной установке размером 35*35*30 см, стороны которой различались цветом (темный и светлый) и текстурой пола и были разделены перегородкой с опускающейся и поднимающейся дверцей. Исследования влияния на выработку предпочтения места и экспрессию выработанного предпочтения места показали, что при внутрибрюшинном введении фенамин (1мг/кг) значительно повышал время нахождения животного в отсеке, в котором вводился препарат. На фоне блокады рецепторов орексина его антагонистами в дозах 1мкг и 10мкг эффект фенамина проявлялся в меньшей степени (табл. 4,5,6,7).
Табл. 4. Эффекты антагонистов орексина (1мкг/мкл) на фоне фенамина в реакции условного предпочтения места (влияние на выработку предпочтения места)
Препарат
Время в отсеке без введения препаратов (с.)
Время в отсеке с в введением препаратов (с.)
Число переходов из отсека в отсек
Фенамин1мг/кг, в/б
175,4 ± 44
424,6±44*
7±2
SB-408124 1мкг/мкл, в/ж+ 1мл физ. р-ра, в/б
296±15
304±15
10±2
SB-408124 1мкг/мкл, в/ж+ фенамин1мг/кг, в/б
285±26
315±27
11±3
Orexin B18-28 1мкг/мкл, в/ж +1мл физ.р-ра , в/б
306±13
294±13
13±5
Orexin B18-28 1мкг/мкл, в/ж+ фенамин1мг/кг, в/б
234±51
331±24*
11±3,5
Напротив, в опытах влияния препаратов на выработку предпочтения места SB-408124 (1мкг) и Orexin B18-28 (1мкг) при введении их внутрижелудочково достоверно не влияли на нахождение животного в отсеке. При введении SB-408124 (1мкг, в/ж) совместно с фенамином (1мг/кг, в/б) время нахождения в отсеке с введением препаратов, относительно показателей фенамина (1мг/кг, в/б), снижалось с 424,6с до 315с, а число переходов из отсека в отсек увеличилось с 7 до 11. При введении Orexin B18-28 (1мкг, в/ж) совместно с фенамином (1мг/кг, в/б) время нахождения в отсеке с введением препаратов, относительно показателей фенамина (1мг/кг, в/б), снижалось с 424,6с до 331с, а число переходов из отсека в отсек увеличилось так же с 7 до 11.
Табл. 5. Эффекты антагонистов орексина (1мкг/мкл) на фоне фенамина в реакции условного предпочтения места (влияние на экспрессию выработанного предпочтения места)
Препарат
Время в отсеке без введения препаратов (с.)
Время в отсеке с в введением препаратов (с.)
Число переходов из отсека в отсек
Фенамин1мг/кг, в/б
175,4 ± 44
424,6±44*
7±2
SB-408124 1мкг/мкл, в/ж+ 1мл физ. р-ра, в/б
301±15
299±15
10±4
SB-408124 1мкг/мкл, в/ж+ фенамин1мг/кг, в/б
271±24
329±27*
11±3
Orexin B18-28 1мкг/мкл, в/ж +1мл физ.р-ра , в/б
292±13
308±13
14±4
Orexin B18-28 1мкг/мкл, в/ж+ фенамин1мг/кг, в/б
217±17
382±19,6*
10±3
В опытах с влиянием препаратов на экспрессию выработанного предпочтения места SB-408124 (1мкг) и Orexin B18-28 (1мкг) при введении их внутрижелудочково достоверно не влияли на нахождение животного в отсеке. При введении SB-408124 (1мкг, в/ж) совместно с фенамином (1мг/кг, в/б) время нахождения в отсеке с введением препаратов, относительно показателей фенамина (1мг/кг, в/б), снижалось с 424,6с до 329с, а число переходов из отсека в отсек увеличилось с 7 до 11. При введении Orexin B18-28 (1мкг, в/ж) совместно с фенамином (1мг/кг, в/б) время нахождения в отсеке с введением препаратов, относительно показателей фенамина (1мг/кг, в/б), снижалось с 424,6с до 382с, а число переходов из отсека в отсек увеличилось так же с 7 до 10.
Табл. 6. Эффекты антагонистов орексина (10мкг/мкл) на фоне фенамина в реакции условного предпочтения места (влияние на выработку предпочтения места)
Препарат
Время в отсеке без введения препаратов (с.)
Время в отсеке с в введением препаратов (с.)
Число переходов из отсека в отсек
Фенамин1мг/кг, в/б
175,4 ± 44
424,6±44*
7±2
SB-408124 10мкг/мкл, в/ж+ 1мл физ. р-ра, в/б
303±16
297±16
11±2
SB-408124 10мкг/мкл, в/ж+ фенамин1мг/кг, в/б
282±21
318±20
8±2
Orexin B18-28 10мкг/мкл, в/ж +1мл физ.р-ра , в/б
301±10
299±9
6±2
Orexin B18-28 10мкг/мкл, в/ж+ фенамин1мг/кг, в/б
276±36
324±18
13±3
В опытах влияния препаратов на выработку предпочтения места SB-408124 (10мкг) и Orexin B18-28 (10мкг) при введении их внутрижелудочково достоверно не влияли на нахождение животного в отсеке. При введении SB-408124 (10мкг, в/ж) совместно с фенамином (1мг/кг, в/б) время нахождения в отсеке с введением препаратов, относительно показателей фенамина (1мг/кг, в/б), снижалось с 424,6с до 318с, а число переходов из отсека в отсек увеличилось с 7 до 8. При введении Orexin B18-28 (10мкг, в/ж) совместно с фенамином (1мг/кг, в/б) время нахождения в отсеке с введением препаратов, относительно показателей фенамина (1мг/кг, в/б), снижалось с 424,6с до 324с, а число переходов из отсека в отсек увеличилось так же с 7 до 13.
Табл. 7. Эффекты антагонистов орексина (10мкг/мкл) на фоне фенамина в реакции условного предпочтения места (влияние на экспрессию выработанного предпочтения места)
Препарат
Время в отсеке без введения препаратов (с.)
Время в отсеке с в введением препаратов (с.)
Число переходов из отсека в отсек
Фенамин1мг/кг, в/б
175,4 ± 44
424,6±44*
7±2
SB-408124 10мкг/мкл, в/ж+ 1мл физ. р-ра, в/б
294±8
306±7
8±3
SB-408124 10мкг/мкл, в/ж+ фенамин1мг/кг, в/б
264±21
336±23
11±4
Orexin B18-28 10мкг/мкл, в/ж +1мл физ.р-ра , в/б
299±11
301±9
10±2
Orexin B18-28 10мкг/мкл, в/ж+ фенамин1мг/кг, в/б
242±15
358±14
7±3
В опытах с влиянием препаратов на экспрессию выработанного предпочтения места SB-408124 (10мкг) и Orexin B18-28 (10мкг) при введении их внутрижелудочково достоверно не влияли на нахождение животного в отсеке. При введении SB-408124 (10мкг, в/ж) совместно с фенамином (1мг/кг, в/б) время нахождения в отсеке с введением препаратов, относительно показателей фенамина (1мг/кг, в/б), снижалось с 424,6с до 336с, а число переходов из отсека в отсек увеличилось с 7 до 11. При введении Orexin B18-28 (10мкг, в/ж) совместно с фенамином (1мг/кг, в/б) время нахождения в отсеке с введением препаратов, относительно показателей фенамина (1мг/кг, в/б), снижалось с 424,6с до 358с, а число переходов из отсека в отсек не изменялось.
Табл. 8. Эффекты антагонистов орексина (0,1мкг/мкл) на фоне фенамина в реакции условного предпочтения места (влияние на выработку предпочтения места)
Препарат
Время в отсеке без введения препаратов (с.)
Время в отсеке с в введением препаратов (с.)
Число переходов из отсека в отсек
Фенамин1мг/кг, в/б
175,4 ± 44
424,6±44*
7±2
SB-408124 0,1мкг/мкл, в/ж+ 1мл физ. р-ра, в/б
306±13
394±13
8±2
SB-408124 0,1мкг/мкл, в/ж+ фенамин1мг/кг, в/б
196±20
404±22
7±2
Orexin B18-28 0,1мкг/мкл, в/ж +1мл физ.р-ра , в/б
303±11
297±12
11±3
Orexin B18-28 0,1мкг/мкл, в/ж+ фенамин1мг/кг, в/б
185±33
415±19
12±3
В опытах влияния препаратов на выработку предпочтения места SB-408124 (0,1мкг) и Orexin B18-28 (0,1мкг) при введении их внутрижелудочково достоверно не влияли на нахождение животного в отсеке. При введении антагонистов орексина (0,1мкг, в/ж) совместно с фенамином (1мг/кг, в/б) оба антагониста достоверно не влияли на эффекты фенамина.
Табл. 9. Эффекты антагонистов орексина (0,1мкг/мкл) на фоне фенамина в реакции условного предпочтения места (влияние на экспрессию выработанного предпочтения места)
Препарат
Время в отсеке без введения препаратов (с.)
Время в отсеке с в введением препаратов (с.)
Число переходов из отсека в отсек
Фенамин1мг/кг, в/б
175,4 ± 44
424,6±44*
7±2
SB-408124 0,1мкг/мкл, в/ж+ 1мл физ. р-ра, в/б
308±11
292±10
7±2
SB-408124 0,1мкг/мкл, в/ж+ фенамин1мг/кг, в/б
188±16
412±17
8±3
Orexin B18-28 0,1мкг/мкл, в/ж +1мл физ.р-ра , в/б
307±10
293±9
9±3
Orexin B18-28 0,1мкг/мкл, в/ж+ фенамин1мг/кг, в/б
198±13
402±13
8±2
В опытах с влиянием препаратов на экспрессию выработанного предпочтения места SB-408124 (0,1мкг) и Orexin B18-28 (0,1мкг) при введении их внутрижелудочково достоверно не влияли на нахождение животного в отсеке. При введении антагонистов орексина (0,1мкг, в/ж) совместно с фенамином (1мг/кг, в/б), оба антагониста достоверно не влияли на эффекты фенамина.
3.2.Исследование эффектов введения антагониста грелина в желудочки мозга для подкрепляющих свойств психоактивных веществ
Крысам самцам Вистар вживляли биполярные электроды в латеральный гипоталамус для исследования реакции самостимуляции вкамере Скиннера и микроканюли в левый боковой желудочек для изучения центральных эффектов действия антагониста грелина (1 мкл на инъекцию) на подкрепляющие свойства фармакологических веществ. Исследования показали, что при системном введении фенамин (1 мг/кг, в/бр) на 32% повышал частоту нажатий педали в камере Скиннера (т.е. число нажатий педали за 10 мин) при регистрации реакции самостимуляции латерального гипоталамуса. А введение пептидного антагониста грелина – [D-Lys3]-GHRP-6 в дозе 1мкг/мкл в желудочек мозга снижало эффекты фенамина (число нажатий на педаль) (табл. 10).
Табл. 10. Действие фенамина при внутрибрюшинном введении, антагониста грелина – [D-Lys3]-GHRP-6 при внутрижелудочковом введении и их комбинации на реакцию самостимуляции у крыс.
Вещество, доза
Число нажатий на педаль за 10мин
Пороги самостимуляции
(мкА)
До введения
После введения
Довведения
После введения
Фенамин 1мг/кг, в/б
144,5±19
100%
216,25±26*
132%
143,25±18
100%
125±22
85,9%
[D-Lys3]-GHRP-6 1мкг/мкл, в/ж
86.25±11
100%
81±10
95.1%
91.8±12
100%
92.5±12
100%
Фенамин 1мг/кг, в/б + [D-Lys3]-GHRP-6 1мкг/мкл, в/ж
89±11
100%
105,5±13
118%
53±7
100%
46,9±6
90,1%
[D-Lys3]-GHRP-6 10мкг/мкл, в/ж
79±11
100%
73,5±8
94,6%
135,8±13
100%
138,1±10
102%
Фенамин 1мг/кг, в/б + [D-Lys3]-GHRP-6 10мкг/мкл, в/ж
67±14
100%
81±9
128%
83,2±6
100%
104±5
125%
[D-Lys3]-GHRP-6 0,1 мкг/мкл, в/ж
88,2±9
100%
84±7
98,1%
96±10
100%
99±9
101%
Фенамин 1мг/кг, в/б + [D-Lys3]-GHRP-6 0,1 мкг/мкл, в/ж
92±11
100%
124±7*
128%
71±9
100%
90±6*
117%
Напротив, [D-Lys3]-GHRP-6 во всех трех дозах при внутрижелудочковом введении достоверно не влиял на показатели реакции самостимуляции в камере Скиннера. При введении [D-Lys3]-GHRP-6 в дозе 1мкг (в/ж) с фенамином (1мг/кг, в/б), наблюдалось снижение эффектов фенамина. Так число нажатий на педаль за 10 минут, относительно показателей фенамина (1мг/кг, в/б), снижается со 132% до 118%, а пороги самостимуляции снижаются со 122,9% до 90,1%. При введении антагониста грелина [D-Lys3]-GHRP-6 в дозе 10мкг (в/ж) с фенамином (1мг/кг, в/б), показатели фенамина не изменялись. При введении [D-Lys3]-GHRP-6 в дозе 0,1мкг (в/ж) с фенамином (1мг/кг, в/б), эффект фенамина также достоверно не меняется.
Опыты с условной реакцией предпочтения места проводили в прямоугольной двухкамерной экспериментальной установке размером 35*35*30 см, стороны которой различались цветом (темный и светлый) и текстурой пола и были разделены перегородкой с опускающейся и поднимающейся дверцей. Исследования влияния на выработку предпочтения места и экспрессию выработанного предпочтения места показали, что при внутрибрюшинном введении фенамин (1мг/кг) значительно повышал время нахождения животного в отсеке, в котором вводился препарат. На фоне блокады рецепторов грелина антагонистом грелина – [D-Lys3]-GHRP-6 в дозах 1мкг эффект фенамина проявлялся в меньшей степени (табл. 11,12).
Табл. 11. Эффекты антагониста грелина на фоне фенамина в реакции условного предпочтения места (влияние на выработку предпочтения места)
Препарат
Время в отсеке без введения препаратов (с.)
Время в отсеке с в введением препаратов (с.)
Число переходов из отсека в отсек
Фенамин1мг/кг, в/б
175,4 ± 44
424,6±44*
7±2
[D-Lys3]-GHRP-6 1мкг/мкл, в/ж+ 1мл физ. р-ра, в/б
301±11
299±11
9±3
[D-Lys3]-GHRP-6 1мкг/мкл, в/ж+ фенамин1мг/кг, в/б
268±34
332±33
10±3
[D-Lys3]-GHRP-6 10мкг/мкл, в/ж +1мл физ.р-ра , в/б
306±12
294±11
10±2
[D-Lys3]-GHRP-6 10мкг/мкл, в/ж+ фенамин1мг/кг, в/б
182±28
418±28*
8±3
[D-Lys3]-GHRP-6 0,1мкг/мкл, в/ж +1мл физ.р-ра , в/б
305±8
295±10
7±2
[D-Lys3]-GHRP-6 0,1мкг/мкл, в/ж+ фенамин1мг/кг, в/б
184±30
416±28
8±3
Напротив, в опытах влияния препаратов на выработку предпочтения места [D-Lys3]-GHRP-6 при введении внутрижелудочково во всех трех дозах достоверно не влияли на нахождение животного в отсеке. При введении антагониста грелина в дозе 1мкг (в/ж) совместно с фенамином (1мг/кг, в/б) время нахождения в отсеке с введением препаратов, относительно показателей фенамина (1мг/кг, в/б), снижалось с 424,6с до 332с, а число переходов из отсека в отсек увеличилось с 7 до 10. При введении антагониста грелина в дозе 10мкг(в/ж) совместно с фенамином (1мг/кг, в/б) показатели фенамина не менялись. При введении [D-Lys3]-GHRP-6 в дозе 0,1мкг (в/ж) совместно с фенамином (1мг/кг, в/б) время нахождения в отсеке с введением препаратов, и число переходов из отсека в отсек, относительно показателей фенамина (1мг/кг, в/б), также достоверно не изменялось.
Табл. 12. Эффекты антагониста грелина на фоне фенамина в реакции условного предпочтения места (влияние на экспрессию выработанного предпочтения места)
Препарат
Время в отсеке без введения препаратов (с.)
Время в отсеке с в введением препаратов (с.)
Число переходов из отсека в отсек
Фенамин1мг/кг, в/б
175,4 ± 44
424,6±44*
7±2
[D-Lys3]-GHRP-6 1мкг/мкл, в/ж+ 1мл физ. р-ра, в/б
293±14
307±14
9±3
[D-Lys3]-GHRP-6 1мкг/мкл, в/ж+ фенамин1мг/кг, в/б
240±21
360±24*
9±2
[D-Lys3]-GHRP-6 10мкг/мкл, в/ж +1мл физ.р-ра , в/б
299±16
301±16
9±2
[D-Lys3]-GHRP-6 10мкг/мкл, в/ж+ фенамин1мг/кг, в/б
172±17
428±13
6±2
[D-Lys3]-GHRP-6 0,1мкг/мкл, в/ж +1мл физ.р-ра , в/б
297±12
303±12
9±3
[D-Lys3]-GHRP-6 0,1мкг/мкл, в/ж+ фенамин1мг/кг, в/б
202±18
398±21
7±2
В опытах с влиянием препаратов на экспрессию выработанного предпочтения места антагонист грелина при введении внутрижелудочково во всех трех дозах достоверно не влияли на нахождение животного в отсеке. При введении [D-Lys3]-GHRP-6 в дозе 1мкг (в/ж) совместно с фенамином (1мг/кг, в/б) время нахождения в отсеке с введением препаратов, относительно показателей фенамина (1мг/кг, в/б), снижалось с 424,6с до 360с, а число переходов из отсека в отсек увеличилось с 7 до 9. При введении антагониста грелина в дозе 10мкг (в/ж) совместно с фенамином (1мг/кг, в/б) показатели фенамина достоверно не изменялись. При введении [D-Lys3]-GHRP-6 в дозе 0,1мкг (в/ж) совместно с фенамином (1мг/кг, в/б) время нахождения в отсеке с введением препаратов, относительно показателей фенамина (1мг/кг, в/б), снижалось с 424,6с до 398с, число переходов из отсека в отсек не изменялось.
3.3.Исследование эффектов введения астрессина в желудочки мозга для подкрепляющих свойств психоактивных веществ.
Крысам самцам Вистар вживляли биполярные электроды в латеральный гипоталамус для исследования реакции самостимуляции вкамере Скиннера и микроканюли в левый боковой желудочек для изучения центральных эффектов действия астрессина (антагониста кортиколиберина) (1 мкл на инъекцию) на подкрепляющие свойства фармакологических веществ. Исследования показали, что при системном введении фенамин (1 мг/кг, в/бр) на 32% повышал частоту нажатий педали в камере Скиннера (т.е. число нажатий педали за 10 мин) при регистрации реакции самостимуляции латерального гипоталамуса. Астрессин при введении внутрижелудочково во всех трех дозах снижал число нажатий на педаль. А введение его в обоих дозах (1мкг/мкл; 10 мкг/мкл) в желудочек мозга снижало эффекты фенамина (число нажатий на педаль и пороги самостимуляции) (табл. 13).
Табл. 13. Действие фенамина при внутрибрюшинном введении, астрессина при внутрижелудочковом введении и их комбинации на реакцию самостимуляции у крыс.
Вещество, доза
Число нажатий на педаль за 10мин
Пороги самостимуляции
(мкА)
До введения
После введения
Довведения
После введения
Фенамин 1мг/кг, в/б
144,5±19
100%
216,25±26*
132%
143,25±18
100%
125±22
85,9%
Астрессин 1мкг/мкл, в/ж
80±10
100%
57±7*
73%
79±10
100%
89±11
117%
Фенамин 1мг/кг, в/б + астрессин 1мкг/мкл, в/ж
85,5±11
100%
101,25±13
116,8%
89,4±11
100%
67,5±8*
80%
Астрессин 10мкг/мкл, в/ж
115,3±13
100%
81±11*
76%
142±15
100%
157,7±18
111%
Фенамин 1мг/кг, в/б + астрессин 10мкг/мкл, в/ж
125,7±13
100%
138±10
106,3%
71,1±8
100%
59,9±9
85%
Астрессин 0,1 мкг/мкл, в/ж
114±6
100%
98±4
94%
119±8
100%
115,8±6
97%
Фенамин 1мг/кг, в/б + астрессин 0,1 мкг/мкл, в/ж
115,3±14
100%
136,4±10
126%
73,4±9
100%
87,3±6
121%
При введении астрессина в дозе 1мкг (в/ж) с фенамином (1мг/кг, в/б), наблюдалось снижение эффектов фенамина. Так число нажатий на педаль за 10 минут, относительно показателей фенамина (1мг/кг, в/б), снижается со 132% до 117%, а пороги самостимуляции снижаются со 85,9% до 80%. При введении астрессина в дозе 10мкг (в/ж) с фенамином (1мг/кг, в/б), также наблюдается снижение эффектов фенамина. Число нажатий на педаль за 10 минут, относительно показателей фенамина (1мг/кг, в/б), снижается со 132% до 106%, а пороги самостимуляции не изменяются. При введении астрессина в дозе 0,1мкг (в/ж) с фенамином (1мг/кг, в/б), эффект фенамина достоверно не меняется.
Опыты с условной реакцией предпочтения места проводили в прямоугольной двухкамерной экспериментальной установке размером 35*35*30 см, стороны которой различались цветом (темный и светлый) и текстурой пола и были разделены перегородкой с опускающейся и поднимающейся дверцей. Исследования влияния на выработку предпочтения места и экспрессию выработанного предпочтения места показали, что при внутрибрюшинном введении фенамин (1мг/кг) значительно повышал время нахождения животного в отсеке, в котором вводился препарат. На фоне блокады рецепторов кортиколиберина астрессином эффект фенамина проявлялся в меньшей степени (табл. 14,15).
Табл. 14. Эффекты астрессина на фоне фенамина в реакции условного предпочтения места (влияние на выработку предпочтения места)
Препарат
Время в отсеке без введения препаратов (с.)
Время в отсеке с в введением препаратов (с.)
Число переходов из отсека в отсек
Фенамин1мг/кг, в/б
175,4 ± 44
424,6±44*
7±2
Астрессин 1мкг/мкл, в/ж+ 1мл физ. р-ра, в/б
307±11
293±11
10±3
Астрессин 1мкг/мкл, в/ж+ фенамин1мг/кг, в/б
249±33
351±37
9±4
Астрессин 10мкг/мкл, в/ж +1мл физ.р-ра , в/б
293±11
307±11
7±2
Астрессин10мкг/мкл, в/ж+ фенамин1мг/кг, в/б
272±30
328±32
12±3
Астрессин 0,1мкг/мкл, в/ж +1мл физ.р-ра , в/б
302±7
298±7
8±2
Астрессин0,1мкг/мкл, в/ж+ фенамин1мг/кг, в/б
202±25
398±28
10±3
В опытах влияния препаратов на выработку предпочтения места астрессин при введении внутрижелудочково в дозе 1мкг (в/ж) совместно с фенамином (1мг/кг, в/б) время нахождения в отсеке с введением препаратов, относительно показателей фенамина (1мг/кг, в/б), снижалось с 424,6с до 351с, а число переходов из отсека в отсек увеличилось с 7 до 9. При введении астрессина в дозе 10мкг (в/ж) совместно с фенамином (1мг/кг, в/б) время нахождения в отсеке с введением препаратов, относительно показателей фенамина (1мг/кг, в/б), снижалось с 424,6с до 328с, а число переходов из отсека в отсек увеличилось с 7 до 12. При введении астрессина в дозе 0,1мкг (в/ж) совместно с фенамином (1мг/кг, в/б) время нахождения в отсеке с введением препаратов, относительно показателей фенамина (1мг/кг, в/б), снижалось с 424,6с до 398с, а число переходов из отсека в отсек увеличилось с 7 до 10.
Табл. 15. Эффекты астрессина на фоне фенамина в реакции условного предпочтения места (влияние на экспрессию выработанного предпочтения места)
Препарат
Время в отсеке без введения препаратов (с.)
Время в отсеке с в введением препаратов (с.)
Число переходов из отсека в отсек
Фенамин1мг/кг, в/б
175,4 ± 44
424,6±44*
7±2
Астрессин 1мкг/мкл, в/ж+ 1мл физ. р-ра, в/б
297±15
303±15
13±4
Астрессин 1мкг/мкл, в/ж+ фенамин1мг/кг, в/б
260±27,5
340±26,7*
8,6±1,8
Астрессин 10мкг/мкл, в/ж +1мл физ.р-ра , в/б
308±8
292±9
11±2
Астрессин 10мкг/мкл, в/ж+ фенамин1мг/кг, в/б
281±21
319±23
5±2
Астрессин 0,1мкг/мкл, в/ж +1мл физ.р-ра , в/б
293±14
307±13
11±2
Астрессин0,1мкг/мкл, в/ж+ фенамин1мг/кг, в/б
212±17
388±18
5±2
В опытах с влиянием препаратов на экспрессию выработанного предпочтения места астрессин при введении внутрижелудочково в дозе 1мкг (в/ж) совместно с фенамином (1мг/кг, в/б) время нахождения в отсеке с введением препаратов, относительно показателей фенамина (1мг/кг, в/б), снижалось с 424,6с до 340с, а число переходов из отсека в отсек увеличилось с 7 до 9. При введении астрессина в дозе 10мкг (в/ж) совместно с фенамином (1мг/кг, в/б) время нахождения в отсеке с введением препаратов, относительно показателей фенамина (1мг/кг, в/б), снижалось с 424,6с до 319с, число переходов из отсека в отсек при этом снизилось с 7 до 5. При введении астрессина в дозе 0,1мкг (в/ж) совместно с фенамином (1мг/кг, в/б) время нахождения в отсеке с введением препаратов, относительно показателей фенамина (1мг/кг, в/б), снижалось с 424,6с до 388с, число переходов из отсека в отсек снизилось до 5.
3.4.Взаимодействие орексина и грелина с антагонистом кортиколиберина (астрессином)
Крысам самцам Вистар вживляли биполярные электроды в латеральный гипоталамус для исследования реакции самостимуляции вкамере Скиннера и микроканюли в левый боковой желудочек для изучения центральных эффектов действия орексина, грелина, астресина (антагониста кортиколиберина), а также их комбинации (1 мкл на инъекцию). Исследования показали, что орексин в дозе 10мкг (в/ж) и грелин при введении в дозах 1мкг и 10мкг (в/ж) повышали число нажатий на педаль за 10 минут (табл. 16,17).Астрессин в тех же дозах при внутрижелудочковом введении снижал число нажатий на педаль(табл. 16, 17). При этом одновременное введение орексина и астрессина (по 1мкг;по 10мкг, в/ж), так же как и грелина с астрессином (по 1мкг;по 10мкг, в/ж) все же снижали эффекты самостимуляции.
Табл. 16. Взаимодействие орексиновой, грелиновой и кортиколибериновой систем (по 1мкг) на примере реакции самостимуляции у крыс.
Вещество, доза
Число нажатий на педаль за 10мин
Пороги самостимуляции
(мкА)
До введения
После введения
Довведения
После введения
Орексин 1мкг/мкл, в/ж
74±9
100%
77±11
107%
142±18,5
100%
151±21
105%
Грелин 1мкг/мкл, в/ж
85±10
100%
95±12
113%
126±16
100%
122±15
94%
Астрессин 1мкг/мкл, в/ж
80±10
100%
57±7*
73 %
79±10
100%
89±11
117%
Грелин 1мкг/мкл, в/ж+Астрессин 1мкг/мкл, в/ж
95,6±12
100%
80,9±9
84,8%
85±10
100%
97±12
101,6%
Орексин 1мкг/мкл, в/ж+Астрессин 1мкг/мкл, в/ж
72,2±9
100%
65,8±8
90,3%
99,4±12
100%
98,8±12
99%
При введении грелина (1мкг, в/ж) происходило повышение числа нажатий на педаль животными на 13%, а пороги самостимуляции снизились на 6%. При введении астрессина (1мкг, в/ж) происходило резкое снижение числа нажатий на педаль животными на 27%, при этом пороги самостимуляции повышались на 17%. При введении комбинации препаратов астрессина (1мкг, в/ж) и грелина (1мкг, в/ж) происходило снижение числа нажатий на педаль животными на 15%, при этом пороги самостимуляции достоверно не изменялись. При введении комбинации препаратов астрессина (1мкг, в/ж) и орексина (1мкг, в/ж) происходило снижение числа нажатий на педаль животными на 10%, при этом пороги самостимуляции достоверно не изменялись.
Табл. 17. Взаимодействие орексиновой, грелиновой и кортиколибериновой систем (по 10мкг) на примере реакции самостимуляции у крыс.
Вещество, доза
Число нажатий на педаль за 10мин
Пороги самостимуляции
(мкА)
До введения
После введения
Довведения
После введения
Орексин 10 мкг/мкл, в/ж
60,1±12
100%
71,8±15
119,7%
78,1±16
100%
84,1±10
106%
Грелин 10 мкг/мкл, в/ж
58,1±4
100%
68,1±5
118,3%
80,6±5
100%
81,3±7
101,5%
Астрессин 10 мкг/мкл, в/ж
52,2±3
100%
34,2±2
66,5%
48,1±7
100%
66,9±9
139,3%
Грелин 10 мкг/мкл, в/ж+Астрессин 10 мкг/мкл, в/ж
86±7
100%
63,8±9
74%
87±10
100%
104±8
115%
Орексин 10 мкг/мкл, в/ж+Астрессин 10 мкг/мкл, в/ж
74,9±4
100%
58,6±6
82%
85±8
100%
95,3±5
124%
При введении орексина (10мкг, в/ж) происходило повышение числа нажатий на педаль животными на 20%, при этом пороги самостимуляции повышались на 6%. При введении грелина (10мкг, в/ж) происходило повышение числа нажатий на педаль животными на 18%, а пороги самостимуляции достоверно не изменялись. При введении астрессина (10мкг, в/ж) происходило резкое снижение числа нажатий на педаль животными на 34%, при этом пороги самостимуляции повышались на 39%. При введении комбинации препаратов астрессина (10мкг, в/ж) и грелина (10мкг, в/ж) происходило снижение числа нажатий на педаль животными на 26%, при этом пороги самостимуляции повышались на 15%. При введении комбинации препаратов астрессина (10мкг, в/ж) и орексина (10мкг, в/ж) происходило снижение числа нажатий на педаль животными на 18%, а пороги самостимуляции повышались на 24%.
Табл. 18. Взаимодействие орексиновой, грелиновой и кортиколибериновой систем (по 0,1мкг) на примере реакции самостимуляции у крыс.
Вещество, доза
Число нажатий на педаль за 10мин
Пороги самостимуляции
(мкА)
До введения
После введения
Довведения
После введения
Орексин 0,1 мкг/мкл, в/ж
55±4
100%
58±6
105,1%
102,5±8
100%
101,8±5
100%
Грелин 0,1 мкг/мкл, в/ж
53,7±3
100%
55,2±2
103%
96,2±6
100%
95,6±4
99%
Астрессин 0,1 мкг/мкл, в/ж
65±7
100%
61,6±3
95,3%
48,1±5
100%
51,2±4
106,8%
Грелин 0,1 мкг/мкл, в/ж+Астрессин 0,1 мкг/мкл, в/ж
103,3±9
100%
102±7
98%
70±5
100%
70±5
100%
Орексин 0,1 мкг/мкл, в/ж+Астрессин 0,1 мкг/мкл, в/ж
78,3±5
100%
80±8
101,9%
85±7
100%
86,4±6
101%
В опыта введения препаратов орексина, грелина и астрессина, а также их комбинаций в дозах по 0,1мкг внутрижелудочково результаты самостимуляции достоверно не менялись.